最近在使用工程化B细胞或肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的免疫疗法中，B细胞的扩增引起研究人员越来越多的关注。目前用于B细胞扩增的方法效率低、时间长，并且会导致B细胞数量不足和T细胞持续衰竭。Adipogen推出的B-Xpander™蛋白通过模拟B细胞上CD40L和CD40分子之间的自然相互作用，改进了目前B细胞刺激方案。
B-Xpander™是一种有效的增强型多聚体人CD40L细胞因子，用于B细胞活化、B细胞扩增和细胞治疗应用。Adipogen使用专利方法和经鉴定并认证的CHO细胞系进行生产，可提供类似GMP形式的具有超高活性的多聚体人CD40L蛋白。
B-Xpander™的特点：
• 使用经过鉴定和认证的可用于GMP级别生产的CHO细胞系进行生产
• 通过ELISA和基于细胞的检测方法测试的高生物活性
• 通过SEC验证具有高纯度和均一性
• 低内毒素水平
• 批次间一致性好
• 无动物成分来源
• 生产过程不使用交联剂
B-Xpander™具有多聚体人CD40L蛋白的结构，其中人CD40L胞外结构域(aa 116-261)通过ACRP30的胶原结构域人工连接。来自小鼠脂联素的ACRP30无头多聚化结构域序列允许B-Xpander™的多聚化(10-12 x三聚体)。B-Xpander™非常有效地模拟了人CD40L在体内的天然膜辅助聚集，是in vitro和 ex vivo应用的理想选择。
图1.B-Xpander™或多聚体人CD40L的结构
应用实例
B 细胞扩增（增殖）
B-Xpander™与其他级别的多聚人CD40L一样可以有效提升人原代CD19+ B细胞的增殖。与市场上大多数重组CD40L蛋白不同，Adipogen的B-Xpander™和多聚体CD40L蛋白不需要增强子(抗体)就能进行多聚体化和激活。
图2. B细胞增殖检测
通过人原代CD19+ B细胞的增殖来测定B-Xpander™和2种不同科研级别多聚体hCD40L的活性。细胞(5 x 10^4/孔)在RPMI培养基、谷氨酰胺、10%胎牛血清、人IL-4(10ng/ml)、人IL-21(10ng/ml)和不同浓度的B-Xpander™ CD40L (human) (rec.) (Animal-Free) (#AG-40B-0010AF)，CD40L (human) (multimeric) (rec.) (CSG; Certified Serum Grade) (#AG-40B-0010CSG), CD40L (human) (multimeric) (rec.) (#AG-40B-0010)，或对照蛋白培养条件下。4天后使用PMS/MTS (ellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega)对细胞增殖进行定量。4天后细胞扩增10倍，达到5×10^5/孔。
B 细胞激活
B-Xpander™也非常适用于B细胞的激活：B-Xpander的多聚体结构模拟了膜结合人CD40L的生物活性，是一种高效的B细胞激活因子。B-Xpander是激活人类CD40的最有效融合蛋白替代物。使用B-Xpander，不需要增强子(抗体) 就能实现多聚化和超高活性。
图3.B-Xpander™ (Prod. No. AG-40B-0010AF)诱导B细胞活化。
将PBL细胞在96孔板(2x10^5 cells/孔，含10%FCS的100μl RPMI细胞培养基)中于37°C下培养24小时，培养液中含有指定浓度的B-Xpander™ CD40L (human) (rec.) (Animal Free) (#AG-40B-0010AF), CD40L (human) (multimeric) (rec.) (#AG-40B-0010)或三聚体人CD40L作为对照。用PBS洗涤细胞，并分别用2μl CD86-PE和CD19-FITC（在50μl FACS缓冲液(PBS，5%FBS，0.02%叠氮化物)中）在4度避光条件下染色20分钟。用FACS缓冲液洗涤两次后，通过流式细胞仪分析样品。
B细胞扩增在过继性细胞治疗中的作用
在ACT（Adoptive Cell Therapy，过继细胞疗法）过程中，从患者的血液或肿瘤组织中分离出T细胞，体外扩增和活化，然后重新输回患者体内，以靶向清除癌细胞。T细胞可以被改造成表达识别肿瘤特异性抗原的嵌合抗原受体(CARs)或T细胞受体(TCRs )，或者它们可以被扩增以富集具有天然肿瘤特异性反应性的肿瘤浸润性淋巴细胞(TILs, tumor-infiltrating lymphocytes)。然后，患者的肿瘤细胞可以与扩大的TILs相互作用，以筛选可以杀死肿瘤细胞的效应TILs。
最近，研究者发现B细胞在ACT中是一个新的关键角色。TILs浸润的B细胞越多，TIL的扩增和激活越好。用B-Xpander™刺激和扩增并装载肿瘤特异性抗原的B细胞可提高肿瘤特异性TILs的数量。
图4.TILs扩增的ACT工作流程
产品订购详情
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货号 |
产品名称 |
蛋白特点 |
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B-Xpander™系列 |
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AG-40B-0010AF |
B-Xpander™ CD40L (human) (rec.) (Animal Free) |
• 在经过鉴定和认证的CHO细胞中使用无动物成分的培养基生产 • GMP-like生产 • 可用于细胞治疗的离体B细胞扩增 |
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定制产品 |
B-Xpander™ CD40L (human) (rec.) (GMP-Grade) |
• CRO公司的GMP生产 • 可用于细胞治疗的离体B细胞扩增 |
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其他研究级别 |
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AG-40B-0010 |
CD40L (human) (multimeric) (rec.) |
• 在CHO细胞中使用标准血清/培养基产生 • 用于科研级别的离体B细胞扩增 |
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AG-40B-0010CSG |
CD40L (human) (multimeric) (rec.) (Certified Serum Grade) |
• 使用经认证的CHO细胞血清/培养基生产，以实现可追溯性 • 用于科研和细胞治疗的离体B细胞扩增 |
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